导读 大家好,小问来为大家解答以上问题。His标签蛋白纯化步骤，纯化his标签蛋白用镍柱的原理这个很多人还不知道,现在让我们一起来看看吧！1、在
大家好,小问来为大家解答以上问题。His标签蛋白纯化步骤，纯化his标签蛋白用镍柱的原理这个很多人还不知道,现在让我们一起来看看吧！
1、 在重组表达的目的蛋白上添加标签，可以更方便、高效地实现目的蛋白的纯化。这里以Abbkine的His标签净化填料和预填充柱为例，详细说明操作步骤。
2、 离心收集500ml表达目的蛋白的大肠杆菌，在20ml破菌缓冲液中冻融或超声破菌。在该步骤中，可以适当加入PMSF作为蛋白酶抑制剂，但不能使用EDTA。使用2mM2-ME作为还原剂，避免使用DTT。
3、 因为DTT会引起Ni/Co离子的还原。
4、 离心上清液并将其加载到预平衡的纯化柱上(10倍柱体积加载缓冲液平衡)。通常情况下，自然流速可以很好。
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